Методы флюоресцирующих антител: общие сведения
Методы иммунофлюоресценции являются гистохимическими, объединяющими возможности иммунологических и гистохимических исследований. Феномен иммунофлюоресценции дает возможность выявлять специфический вирусный антиген в инфицированных клетках при обработке их мечеными антителами. Комплекс антиген-антитело, несущий в себе флюоресцентный краситель, выявляется под действием УФ-волн люминесцентного микроскопа. Предпосылкой для применения метода иммуфлюоресценции в биологии и медицине явились исследования, доказывающие, что молекула антитела, связанная с химическими группами флюорохромов, не теряет своей иммунологической активности.
Известно две основных модификации МФА, которые получали наиболее широкое распространение для изучения многих вирусов и серодиагностики вирусных заболеваний, таких как бешенство , грипп , парагрипп , аденовирусные-инфекции и ЦМВ-инфекции , корь , герпес , оспа , ветрянка , гепатит В , ГЛПС , КГЛ , колорадская клещевая лихорадка , лихорадка Марбург и лихорадка Эбола , клещевой энцефалит и др.
Обязательным моментом выполнения любой модификации МФА является фиксация антигенсодержащих препаратов. Для этой цели обычно используют ацетон, который не только фиксирует клетки, но и снижает инфекционную активность вирусов. Непосредственно перед фиксацией предметные или покровные стекла с зараженными клеточными культурами, срезами органов и тканей, мазками-отпечатками органов и другими нанесенными вируссодержащими материалами отмывают в физиологическом растворе в течение 20-30 с, после чего их подсушивают на гофрированной фильтровальной бумаге. Высохшие стекла погружают на 20 мин в охлажденный ацетон, затем подсушивают на фильтровальной бумаге. В работе с особо опасными инфекциями для полноты обеззараживания материала препараты дополнительно подвергают облучению под УФ-лампами в течение 40 мин. Препараты, не подлежащие окрашиванию в день фиксации, можно хранить в пенициллиновых флаконах (до 10-15 стекол в 1 флаконе) при температуре -20*С до полугода, а при -70*С - от 1 до 1,5 года. Возможен и другой доступный метод приготовления препаратов, при котором клеточные суспензии со стандартной концентрацией инфицированных клеток раскапывают в лунки или на поверхность предметных стекол.
Смотрите также:
