Цитомегаловирусная инфекция: диагностика, общие сведения
Диагноз цитомегаловирусной инфекции ставят на основании клинической картины, выделения вируса в культуре клеток или его выявления иммунохимическими методами.
Диагноз цитомегаловирусного ретинита ставят при выявлении типичных изменений сетчатки во время офтальмоскопии. Обязательно исключают другие оппортунистические инфекции , сопровождающиеся поражением сетчатки : токсоплазмоз , сифилис , инфекции, вызванные вирусом простого герпеса , инфекции, вызванные вирусом varicella-zoster и инфекции, вызванные вирусом Pneumocystis carinii . Клинический диагноз цитомегаловирусной инфекции ненадежен. Лучший способ подтверждения диагноза - выделение цитомегаловируса в сочетании с не менее чем четырехкратным повышением титра антител к нему или постоянно высоким титром антител. Вирус легко выделяется из крови и биологических жидкостей в однослойных культурах фибробластов человека. Если в исследуемом материале вируса много, как это часто бывает при генерализованной цитомегаловирусной инфекции (врожденной или у больных СПИДом ), его цитопатическое действие проявляется уже через несколько дней. В других случаях, например при цитомегаловирусном мононуклеозоподобном синдроме , вируса в исследуемом материале мало, и его цитопатическое действие проявляется лишь через несколько недель.
Клиническая диагностика ЦМВ-инфекции представляет большие трудности в связи с многоликостью этого заболевания и отсутствием патогномоничных симптомов. Каждый случай заболевания цитомегалией должен быть подтвержден лабораторно. Поэтому специфическая лабораторная диагностика ЦМВ-инфекции приобретает особое значение.
Лабораторная диагностика ЦМВ-инфекции основывается на различных методах выявления возбудителя, его антигенов, специфических антител, характерных морфологических изменений, идентификации вирусной ДНК. Методов много, но нет ни одного универсального, с помощью которого можно было бы решить все диагностические задачи. Существующие методы диагностики имеют разную ценность в зависимости от целей исследования.
Наиболее клинически значимыми являются вирусологические методы, целью которых является изоляция вируса или детекция его антигенов, а также серологические методы, направленные на раздельное определение специфических IgM и IgG. В последнее время в диагностике ЦМВ-инфекции находит все более широкое применение молекулярно-генетический метод определения ДНК ЦМВ.
Материалом для выделения вируса обычно служит моча, слюна, кровь, а также секционный материал. Изоляция вируса чаще всего ведется на культуре фибробластов человеческого эмбриона. Однако практичнее использовать быстрый культуральный метод: культура фибробластов легких эмбриона человека заражается слюной, мочой, кровью и через 48 ч инкубации проводится определение антигенов ЦМВ. Для детекции антигенов применяются моноклональные антитела к предраннему антигену рр72 и к структурному белку тегумента - рр65 . Детекция антигена проводится непрямым методом иммунофлюоресценции . В тех же материалах, а также в соскобах из шейки матки идентифицируют ДНК ЦМВ в ПЦР . Специфические антитела классов М и G выявляют с помощью ИФА или МФА .
Сочетание вирусологических и серологических методов является оптимальным, поскольку позволяет не только диагностировать ЦМВ-инфекцию, но и определить ее активность.
Разумеется, лабораторные методы диагностики позволяют диагностировать инфекцию, однако этиологическая роль вируса устанавливается на основании корреляции результатов лабораторных и клинических методов исследования.
Важным представляется правильная интерпретация результатов лабораторного исследования, их использование в определении отдельных форм ЦМВ-инфекции у женщин репродуктивного возраста и беременных, в антенатальной диагностике, разграничении врожденной и перинатальной ЦМВ- инфекции.
Для диагностики первичной ЦМВ-инфекции основным является установление сероконверсии . Именно сероконверсия от отрицательных результатов исследования к появлению и нарастанию титра специфических антител будет указывать на первичный характер инфекции. Первичная инфекция наблюдается приблизительно у 1-2% восприимчивых матерей, а риск внутриутробной инфекции достигает 50%. Поэтому в популяции женщин детородного возраста, насчитывающей 10% серонегативных, 1-2 случая первичной ЦМВ-инфекции будет приходиться на 1000 беременных, а возможность врожденной инфекции, переданной от матери с первичной ЦМВ-инфекцией, будет соответствовать 1-2 случаям на 2000 живорожденных новорожденных.
Реактивированная инфекция устанавливается в тех случаях, когда определяются специфические IgM в сочетании с IgG против ЦМВ, при этом у абсолютного большинства женщин выявляются и другие маркеры ЦМВ-инфекции.
Персистирующая форма ЦМВ-инфекции в стадии продуктивной репликации диагностируется, если имеется вирусовыделение и наличие специфических IgG при отсутствии IgM.
При латентной форме инфекции не происходит репродукции инфекционного вируса, а репликация вирусной нуклеиновой кислоты продолжается. Единственным указанием на данную форму инфекции является обнаружение анти-ЦМВ-IgG при отрицательных результатах исследования на другие маркеры ЦМВ-инфекции. Правда, обнаружение ДНК ЦМВ в ПЦР возможно. Состояние латенции является обратимым.
Для ускорения диагностики многие лаборатории наносят вирус на однослойные культуры клеток с помощью центрифугирования, инкубируют зараженные культуры в течение 12-24 ч, а затем окрашивают их моноклональными антителами к сверхраннему антигену цитомегаловируса.
Обнаружение цитомегаловируса в моче и слюне само по себе не подтверждает диагноза текущей инфекции (вирус выделяется в окружающую среду месяцы и годы после выздоровления), обнаружение цитомегаловируса в крови более надежно. Для реципиентов внутренних органов и больных СПИДом важно поставить диагноз как можно быстрее. Определение сверхраннего антигена ( рр65 ) цитомегаловируса и его ДНК в лейкоцитах позволяет ускорить диагностику на несколько дней (по сравнению с выделением в культуре клеток).
В диагностике цитомегаловирусного энцефалита и полирадикулопатии используют определение ДНК вируса в СМЖ с помощью ПЦР.
Из серологических методов применяют реакции связывания комплемента, непрямой гемагглютинации, метод непрямой иммунофлюоресценции и ИФА. Титр антител нередко повышается только через 4 нед после заражения и остается высоким на протяжении многих лет. Поэтому однократное серологическое исследование не позволяет отличить текущую инфекцию от перенесенной. Определение IgM-антител к цитомегаловирусу более информативно, но из-за появления в крови ревматоидного фактора возможы ложноположительные результаты.
======================
Смотрите также:
