Альбумин сывороточный: PG2D изомеразная активность
Ко второму типу ферментов с PGH2 D-изомеразной активностью относятся сывороточные альбумины ( Hamberg, 1976 ; Christ-Hazelhof, 1976 ; Watanabe, 1982 ). Hamberg ( Hamberg, 1976 ) впервые показал, что в присутствии бычьего сывороточного альбумина PGH преимущественно изомеризуется в PGD , тогда как в его отсутствие основным продуктом являлся PGE . Такой способностью обладали альбумины различных животных и человека.
Убедительное подтверждение эта гипотеза получила в результате изящно выполненой работы Watanabe ( Watanabe, 1982a ), продемонстрировавшего участие человеческого сывороточного альбумина в регуляции агрегации тромбоцитов . Им была предпринята попытка выделить фермент, ответственный за синтез PGD в плазме, богатой тромбоцитами (факт, неоднократно отмеченный различными исследователями). В результате был очищен и охарактеризован фермент, осуществляющий тиол-независимое специфическое (KM=6мкМ) превращение PGH в PGD (единственный продукт рассматриваемой реакциии) и отличающийся по ряду параметров от всех известных PGH2 D- изомераз. Этот фермент оказался полностью идентичным человеческому сывороточному альбумину. На катализируемый альбумином синтез PGD не оказывали влияния ингибиторы PGH2 D-изомераз ( Shimizu, 1979 ; Urade, 1985 ; Urade, 1987a ) N-этилмалеимид ( Hamberg, 1976 ) и p-гидроксимеркурийбензоат ( Watanabe, 1982a ), но синтез PGD почти полностью подавлялся в присутствии арахидоновой кислоты ( Hamberg, 1976 ; Watanabe, 1982a ). Специфичность катализируемой альбумином изомеразной реакции подтверждена также экспериментом с денатурацией белка. Несмотря на достаточно низкую для ферментов каталитическую активность (0.87 мин-1) высокая скорость реакции по сравнению с неферментативным процессом достигается за счет высокой концентрации сывороточного альбумина в крови (30-35мг/мл или ок. 0.5мМ).
Роль сывороточного альбумина в регуляции агрегации тромбоцитов продемонстрирована на модельных системах: плазме, богатой тромбоцитами, ( PRP ) и отмытых тромбоцитах ( Watanabe, 1982a ). Кинетика вызванной тромбином агрегации тромбоцитов в случае PRP и тромбоцитов, помещенных в среду, содержащую альбумин, была идентичной и отличалась от кинетики, наблюдаемой при использовании отмытых тромбоцитов, помещенных в среду без альбумина, обратимым характером. Кинетика агрегации тромбоцитов становилась практически необратимой при добавлении в среду антител к PGD2 . Подавление агрегации тромбоцитов специфическим ингибитором тромбоксан синтазы приводило к снижению синтеза PGD .
Смотрите также:
