Индукция синтеза гамма-интерферона in vitro
Гамма-интерферон (ИФН-гамма) - фактор специфической иммунной защиты, реализующейся посредством активирования ферментных систем макрофагов. Индукцию синтеза ИФН-гамма сенсибилизированными Т-лимфоцитами вызывает их взаимодействие с антигенами микобактерий.
В качестве антигенов используют как туберкулин ППД , так и специфические антигены, полученные генно-инженерным путем, в частности антигены ESAT-6 (ранний секретируемый антиген с молекулярной массой 6 кДа) и CFP-10 (белок культурального фильтрата, 10 кДа). Генно- инженерные или рекомбинантные антигены отсутствуют в клетках вакцины БЦЖ и других микобактерий. При использовании туберкулина результаты теста индукции ИФН-гамма сопоставимы с результатами туберкулинового кожного теста (прямая корреляция). При использовании генно-инженерных антигенов результаты теста более специфичны и не зависят от предшествующей вакцинации БЦЖ. При обследовании вакцинированных лиц, не имевших контакта с туберкулезной инфекцией, специфичность теста составляет 99%. Чувствительность теста среди больных туберкулезом колеблется от 81 до 89%.
Разработаны тесты и диагностикумы, основанные на краткосрочном культивировании клеток цельной крови или мононуклеарных клеток, выделенных из крови, с антигенами микобактерий туберкулеза in vitro с последующим определением концентрации ИФН-гамма или подсчетом числа Т-лимфоцитов, синтезирующих ИФН-гамма. Концентрацию интерферона, синтезированного в пробирке, определяют методом ИФА с использованием моноклональных антител, связывающих ИФН-гамма. Затем с помощью калибровки стандартного ИФН-гамма определяют его концентрацию в пробирке или лунках планшета.
При проведении теста Elispot количество Т-лимфоцитов, синтезирующих ИФН-гамма, подсчитывают на поверхности чашки, покрытой антителами к ИФН-гамма.
Разработчики диагностикума на основе индукции ИФН-гамма in vitro, который утвержден Агентством по лекарствам и продуктам США, утверждают, что с помощью теста невозможно дифференцировать латентную туберкулезную инфекцию от активного туберкулеза. Поэтому в регионах с высоким уровнем инфицированности тест не имеет прямого диагностического значения. Однако в нашей стране его можно применять для дифференцирования туберкулезной инфекции у детей от поствакцинальной аллергии, а также для оценки уровня специфического иммунитета в процессе лечения.
В настоящее время проходит стадию изучения отечественная тест- система для определения индукции синтеза ИФН-гамма специфическими туберкулезными антигенами in vitro.
Смотрите также:
