Клеточные линии, пакующие
Познакомимся с пакующими клеточными линиями. Для этого нужно смотреть на рис. 3 . Сделаем так: возьмем провирусную ДНК, выкинем из нее y-участок и встроим эту провирусную ДНК с этой делецией в клетку-хозяин. Провирусная ДНК встроится в клеточный геном. Она будет синтезировать вирусные РНК и вирусные белки, но никогда не будет продуцировать сам ретровирус. Понятно? Поскольку РНК не сможет паковаться из-за отсутствия паковочного сайта, она и будет болтаться отдельно от вирусных белков. А те отдельно от этой неприемлемой для них РНК. Получили линию клеток, которую назовем паковочной. Почему - увидите дальше.
Возьмем провирусную ДНК и выкинем из нее часть ее генов, оставив LTR и y- сайт. А вместо выкинутых генов вставим то, что хотим ввести куда-то в качестве нового генетического компонента. Получили вектор.
Введем вектор в паковочную линию. Что будет происходить, сообразили? Вектор встроится в геном клетки и под контролем его LTR начнется синтез векторной РНК . Эта РНК с точки зрения вируса инвалидная. Она не способна к тому, чтобы синтезировать вирусные продукты. Следовательно, она неинфекционна. Но она содержит сигнал упаковки, y- сайт. А паковочная клеточная линия содержит все компоненты, необходимые для формирования вирусной частицы, которые только и ждут, чтобы такое в себя упаковать. Все равно что, лишь бы имело упаковочный пароль - y. И вот пароль находится на векторной РНК. Она будет упакована. Получатся псевдовирусные частицы. Они будут секретироваться из упаковочных клеток. Они будут способны взаимодействовать с клеточными рецепторами других клеток, уже не обязательно паковочных, а, например, тех, куда мы хотим ввести ту генетическую информацию, которую мы вставили в вектор. Они будут способны проникать в эти клетки. Они будут способны обратно транскрибировать векторную РНК. Они будут способны встраивать ее в геном клетки. И все. Эта встроенная ДНК становится частью клеточного генома. Она содержит нужные нам гены. Она содержит регуляторные элементы LTR, которые способны осуществлять транскрипцию этих генов. Но это уже не инфекционные вирусные РНК, а безобидные неинфеmкционные молекулы, которые кодируют ту информацию, которую мы хотели сделать достоянием клеточного генома. Вот мы и познакомились с принципом использования ретровирусов в качестве векторных систем .
Все на деле выглядит сложнее, но пока хватит. Добавим только немного информации по принципам конструкций векторов .
Смотрите также:
