Хромосомы: методы исследований
Хромосомные исследования можно проводить на любых делящихся клетках, содержащих ядро. Для визуализации хромосом необходима конденсация хроматинного материала, которая происходит в процессе деления во всех клетках. Цитогенетические исследования обычно проводят на лимфоцитах крови, однако при подозрении на мозаицизм рекомендуется исследование фибробластов . В пренатальной диагностике хромосомные исследования проводят на материале клеток амниотической жидкости , ворсин хориона или крови плода; в случае предимплантационного пренатального диагноза исследуют бластомеры .
Кариотипирование - это определение кариотипа, проводимое с помощью фотографического или компьютерною изображения предварительно окрашенных хромосом клетки ( рис. 30.1 ). Клетки культивируют, деление останавливают на стадии метафазы митоза , фиксируют и прокрашивают. Если необходимо рассмотреть тонкие детали, возможно исследование хромосом в профазе . Поскольку хромосомы в профазе длиннее и менее конденсированы, определяется 600-1200 полосок, в то время как в метафазе на хромосомах обычно видно только 400-600 полосок. Обработка трипсином с окрашиванием по Гимзе называется методом G-бэндинга , а акрихин обеспечивает Q-бэндинг (флюоресцентный). Для демонстрации центромер используют специальные методы окрашивания.
Гибридизацию In situ применяют для выявления наличия или отсутствия специфических нуклеотидных последовательностей ДНК в хромосомных нитях. Молекулярный зонд используют для распознавания и гибридизации с гомологичной последовательностью ДНК на хромосоме, что позволяет идентифицировать определенную хромосому, хромосомный участок или последовательность ДНК. Если используется флюоресцентный зонд, метод называется FISH .
Сравнительная геномная гибридизация - метод молекулярного цитогенетического анализа, позволяющий составить одновременно каталог всех хромосом. Исследуемую ДНК изолируют из одиночной клетки и амплифицируют с помощью ПЦР ) или из множества клеток пациента и сравнивавают с референтной ДНК полученной от здорового индивида. Тестируемую и референтную ДНК метят разными флюоресцентными красителями (зеленым и красным флюорохромом, соответственно) и затем проводят одновременную гибридизацию исследуемой и референтной ДНК с нормальными хромосомами. Флюоресцирующие изображения хромосом позволяют определить соотношения зеленого и красного цвета и таким образом идентифицировать избыточный или отсутствующий хромосомный материал.
Смотрите также:
