Парвовирусные инфекции: диагностика
Диагностика парвовирусной инфекции осуществляется на основании клинико-эпидемиологических данных и результатов лабораторных исследований. Основными методами лабораторной диагностики являются МФА , РИА , ИФА , направленные на выявление специфических противовирусных антител. В последние годы стандартным методом определения антител к парвовирусу В19 является ИФА на основе рекомбинантных антигенов парвовируса В19 таких фирм, как Medac, IBL (Германия), Novatec (Германия), Seiken (Япония), Biotrin International (Ирландия).
Парвовирусную инфекцию обычно подтверждают измерением титров специфических IgM и IgG с помощью готовых наборов для ИФА. Иногда выделяют вирус из сыворотки или тканей или выявляют в них вирусные антигены и ДНК. Об острой инфекции свидетельствуют характерная клиническая картина и высокий титр IgM или выделение самого вируса, о давно перенесенной - высокий титр IgG.
IgM к вирусу В19, свидетельствующие о текущей или недавно перенесенной инфекции у иммунокомпетентных пациентов, определяют преимущественно с помощью ИФА-тест-систем с сорбированным на твердую фазу рекомбинантным структурным белком капсида VP2 ; антитела класса IgG - с помощью рекомбинантного VP1 .
При инфекционной эритеме и остром артрите вирус из сыворотки обычно не удается выделить, но титр IgM высокий. При апластических кризах параллельно с высоким титром IgM в сыворотке определяют большое количество вируса или eго ДНК. В костном мозге обнаруживают характерные гигантские эритробласты и гипоплазию эритроидного ростка . У больных с иммунодефицитом антитела часто не удается определить, но в сыворотке обнаруживают вирус или его ДНК.
Диагноз внутриутробной инфекции подтверждает водянка плода при наличии в околоплодных водах или крови плода вирусной ДНК в сочетании с высоким титром специфических IgM у беременной .
Наиболее чувствительными методами индикации вируса являются молекулярно-генетические методы - молекулярная гибридизация (дот-, слот-блоттинг) и ПЦР - позволяют выявлять ДНК вируса в клинических образцах (сыворотке крови, лейкоцитах, синовиальной мембране, костном мозге, в отделяемом респираторного тракта, в амниотической жидкости или крови плода). При молекулярной гибридизации ДНК вируса легче обнаружить в лейкоцитах, чем в сыворотке крови.
При использовании серологических и молекулярно-генетических методов исследования следует помнить, что у больных с преходящими апластическими кризами можно обнаружить IgM к вирусу, у больных с иммунодефицитом и хронической анемией специфических антител нет, но в сыворотке крови выявляются частицы вируса и вирусная ДНК.
Цитологическое исследование мазков крови (костного мозга) с подсчетом числа ретикулоцитов и определением типичных дегенеративных изменений в клетках миелоидного ряда и клетках мегакариоцитного ряда (появление гигантских пронормобластов диаметром 25-32 мкм с большими эозинофильными внутриядерными включениями, вакуолизацией цитоплазмы, характерными выступами по типу "собачье ухо") показано у пациентов с признаками клинически значимой анемии или транзиторного апластического криза .
УЗИ и определение альфа-фетопротеина проводят женщинам с осложненным течением беременности .
В связи с тем что парвовирус В19 не способен эффективно реплицироваться в стандартных линиях культур клеток, широкое использование вирусологического метода диагностики данного агента ограничено. Выделение вируса из клинического материала возможно in vitro в первичных культурах клеток человека и обезьян (в культуре клеток-предшественниц эритроидного ряда - культуре клеток костного мозга, печени плода, пуповинной крови, периферической крови), а также в специальных линиях мегакариобластных клеток человека - МВ-02 и UT-7/Epo-S1, а также линии клеток эритроидной лейкемии человека - JK-1 и KU812Ep6. Для заражения используют культуры клеток с не полностью сформированным монослоем на стадии активного деления клеточных элементов в период пересева или в период их логарифмического роста (30-50% монослоя). Для инициации репликации вируса во всех клеточных системах требуется наличие эритропоэтина. В инфицированных клетках вирус образует типичные внутриядерные тельца-включения. Инфекция носит цитолитический характер и не сопровождается развитием других специфических изменений. Лабораторной модели инфекции на животных не существует.
Дифференциальный диагноз проводят с корью , краснухой , скарлатиной , внезапной экзантемой , энтеровирусными инфекциями , псевдотуберкулезом , системными заболеваниями , токсико-аллергическими состояниями , вызванными приемом лекарств и т.д.
Смотрите также:
