Мембранные белки: пэтчи и пэтчинг
Если мембранные белки сшить с помощью антител, они собираются в кластеры, образуя на поверхности клетки дискретные зоны неправильной формы - пэтчи . Образование подобных пятен - пэтчинг - индуцируется связывающими антителами или связывающими лектинами , которые называются лигандами .
То, что появление пятен на самом деле есть прямое следствие связывания мембранных белков с антителами , можно показать с помощью моновалентных фрагментов антител, получаемых при обработке последних протеолитическими ферментом папаином . В результате такой обработки во фрагментах антител сохраняется только по одному участку связывания с антигеном, и поэтому они не могут сшивать друг с другом расположенные рядом мембранные белки. Если текие моновалентные фрагменты антител пометить флуоресцентным красителем, то обнаруживается, что, хотя их связывание с белками на поверхности лимфоцитов и происходит, распределение метки оказывается равномерным; молекулам белка не удается образовать пятна, аналогичные тем, которые индуцируются бивалентными антителами .
Распределение белков в мембранах можно наблюдать на молекулярном уровне с помощью лигандов, присоединенных к ферритину - железосодержащему белку. В большинстве случаев, когда связанные с ферритином лиганды используются для изучения взаимного расположения мембранных макромолекул в условиях, предотвращающих индуцируемую лигандами кластеризацию, обнаруживается, что в неповрежденной плазматической мембране одиночных клеток, суспендированных в жидкости, макромолекулы распределены диффузно. С другой стороны, если эксперимент проводится на нефиксированных мембранах, то меченые молекулы перераспределяются и образуют кластеры.
Смотрите также:
