Индикация вирусов и выделение вирусов
Индикация вирусов и выделение вирусов (как более частный раздел этого направления исследований) являются основными составляющими вирусологической диагностики вирусных инфекций. Обнаружение вирусов, вирусных антигенов, вирусной РНК или ДНК, а в некоторых случаях - характерных патологических изменений (например, в печени при желтой лихорадке ) или специфических включений (например, тельца Бабеша-Негри в ткани мозга при бешенстве) обеспечивают необходимую информацию для решения многих вопросов. Полученные данные помогают расшифровать этиологию заболевания, установить циркуляцию вирусов на обследуемых территориях, изучить многие кардинальные аспекты эпизоотологии и эпидемиологии зоонозных вирусных инфекций, определить санитарное состояние территории в отношении некоторых антропогенных инфекций, вызываемых, например, широко распространенными энтеровирусами.
В качестве лабораторных моделей для выделения вирусов из клинических и полевых материалов используют новорожденных и взрослых белых мышей, морских свинок, белых крыс, сирийских хомячков, обезьян, куриные и утиные эмбрионы, различные виды перевиваемых клеточных культур: почки сирийских хомячков (ВНК-21), поросят (СПЭВ и PS), обезьян (Vero), собак (МДСК), первичные культуры фибробластов эмбрионов человека, кур и многие другие. У чувствительных видов лабораторных животных, инфицированных вируссодержащим материалом, наблюдается клинически выраженное заболевание и гибель. Мозг, а иногда другие органы и ткани больных животных служат хорошим источником приготовления специфических вирусных антигенов. Результатом заражения вируссодержащим материалом клеточных культур может быть развитие цитопатического действия, образование бляшек под агаровым покрытием, феномен интерферирующего действия, выявляемого при повторной инокуляции клеток индикаторным, заведомо цитопатогенным вирусом.
Высокой эффективностью при выделении вирусов денге , некоторых других флавивирусов и буньявирусов обладает метод заражения комаров, в первую очередь крупных некровососущих комаров рода Toxorhynchites .
Для индикации вирусов в клинических, полевых и экспериментальных материалах применяют высокочувствительные серологические методы с использованием поли- или моноклональных антител, меченных ферментами (например, пероксидазой хрена, щелочной фосфатазой и т.п.), флюорохромами, радиоактивными нуклидами и редкоземельными металлами - лантанидами . Наибольшее применение из них имеют ИФА , непрямой МФА , в меньшей степени - РНГА и лантанидный иммунофлюоресцентный анализ ( ЛИФА ).
Для детекции вирусных нуклеиновых кислот широкое применение нашли модификации метода полимеразной цепной реакции - ОТ-ПЦР и ПЦР в реальном времени . Не потерял своего значения на сегодняшний день и метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот .
Для выделения и детекции вирусов из клинических и секционных материалов используют следующие материалы:
1) при заболеваниях органов дыхания , кори , краснухе : глоточные смывы, зевные тампоны, мокрота, фекалии, кусочки легкого, соскобы с бронхов;
2) при заболеваниях ЦНС :
- бешенство : слюна, мозг;
- американские энцефалиты лошадей : кровь, СМЖ, глоточные смывы;
- клещевой энцефалит , японский энцефалит , энцефалит Сент-Луис , ЛХМ и др.: кровь, СМЖ, мозг;
- герпес : глоточные смывы, СМЖ, мозг;
- инфекции ECHO и инфекции Коксаки : глоточные смывы, СМЖ, фекалии, мозг;
3) при болезнях кожи и слизистых оболочек - корь , краснуха , герпес простой , оспа и оспоподобные заболевания - глоточные смывы; при простом герпесе , ветряной оспе и опоясывающем лишае - дополнительно берется жидкость везикул;
4) при геморрагических лихорадках - желтая геморрагическая лихорадка , крымская геморрагическая лихорадка , геморрагическая лихорадка Ласса , геморрагическая лихорадка Марбург , геморрагическая лихорадка Эбола , геморрагическая лихорадка Рифт-Валли и др. - кровь, внутренние органы, иногда ткани мозга.
Смотрите также:
